Quantificação de [32P] fosfoproteínas em gel de pollacrilamida pela Radiação Cerenkov: vantagens sobre outros procedimentos

Autores

  • Carlos A. Gonçalves Departamento de Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, UFRGS, Porto Alegre, RS.
  • Guido Lenz Departamento de Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, UFRGS, Porto Alegre, RS.
  • Christianne Salbego Departamento de Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, UFRGS, Porto Alegre, RS.
  • Carmem Gottfried Departamento de Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde, UFRGS, Porto Alegre, RS.

DOI:

https://doi.org/10.5902/2179460X26714

Palavras-chave:

Radiação Cerenkov, cintilação líquida, fosforilação proteica.

Resumo

A fosforilação proteica tem sido reconhecida como um importante mecanismo no controle das atividades celulares. Há várias maneiras para medir a marcação com 32P de fosfoproteinas separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida, incluindo densitometria de filmes autorradiográficos, cintilação líquida e radiação Cerenkov. Este trabalho compara tais diferentes procedimentos e aponta as vantagens do uso da radiação Cerenkov para medir a incorporação de fosfato radioativo em proteínas.

Downloads

Não há dados estatísticos.

Referências

COOPER, T.G. (1977). Radiochemistry. In The tools of biochemistry. Ed. by T.G. Copper, Willey-interscience Publication.

DE MATTOS, A.G., DE FREITAS, M.S., GONÇALVES, C.A., AND PESSOAPUREUR, R. (1996). Developmentally regulated in vitro phosphorylation of 85 kDa Triton-insoluble protein of cerebral cortex of rats. Develop. Brain Res., 96: 76-82.

GARRISON, J.C. (1993). Study of protein phosphorylation in intact cells. In Protein phosphorylation. A practical approach. Ed. D.G. Hardie, IRL press.

GONÇALVES, C.A., SALBEGO, C.G., WOFCHUK, S.T., ROCHA, E., AND RODNIGHT, R. (1990). Properties of a protein phosphorylating system that labels a 47 kDa phosphoprotein (ppH-47) in slices of rat hippocampus. Neurosci. Res. Commun., 6:129-134.

GONÇALVES, C.A., AND RODNIGHT, R. (1992). Apparent identity of ppH-47 with a form of glial fibrillary acidic protein. Neurosci. Res. Commun., 11:109-117.

GONÇALVES, C.A., AND RODNIGHT, R. (1993). Electrotransfer of fixed phosphoproteins frm pieces of dried polyacrylamide gel to small disks of nitrocellulose, nylon or polyvinyldene difluoride. Electrophoresis, 14:789-793.

GOULD, M.J., CATHER, R., AND WINGET, G.D. (1972). Advantages of the use of Cerenkov counting of determination of 32p in photophosphorylation research. Anal, Biochem., 50:540-548.

HUTTNER, W.B., DEGENNARO, L.J., AND GREENGARD, P. (1987). Differential phosphorylation of multiple sites in purified protein I by cyclic AMP-dependent and calcium-dependent protein kinases. J. Biol. Chem., 256:1482-1488.

JUANG, R.-H., CHANG, Y.-D., SUNG, H., SU, J.-C. (1984), Over-drying method for polyacrilamide gel slab packed in cellophane sandwich. Analytical Biochemistry, 141 :348-350.

KELLOGG, T.F. (1983). The eftect of sample composition and vial type on Cerenkov counting in a scintillation counter. Anal. Biochem., 134:137-143. LASKEY, R.A. (1980). The use of intensifying or organic scintilators for visualizing radioactive molecules resolved by electrophoresis. Meth. In Enzymol.,65:363-371.

PEREIRA, M.E., GONÇALVES, C.A., AND RODNIGHT, R. (1994). Phosphorylation in vitro of GFAP is increased in rat hippocampus by administration of 2,5-hexanedione. Brain Res., 656:417-419.

ROACH, P.J. (1991). Multisite and hierarchal protein phosphorylation. J. Biol. Chem.,266:14139-14142.

RODNIGHT R., ZAMANI R., TWEEDALE, A. (1988). An investigation of

experimental conditions for studying protein phosphorylation in microslices of rat brain by two-dimensional electrophoresis. Journal of Neuroscience Methods, 24:27-38.

RODNIGHT, R., AND WOFCHUK, S.T. (1992). Roles for protein phosphorylation in synaptic transmission. Essays in Biochem., 27:91-102.

SALBEGO, C., ANO ROONIGHT, R. (1996). A developmental study of protein phosphorylating systems stimulated by phorbol dibutyrate in micro-slices of rat brain. Neurocheni. Int., 28:431-438.

Downloads

Publicado

1997-12-10

Como Citar

Gonçalves, C. A., Lenz, G., Salbego, C., & Gottfried, C. (1997). Quantificação de [32P] fosfoproteínas em gel de pollacrilamida pela Radiação Cerenkov: vantagens sobre outros procedimentos. Ciência E Natura, 19(19), 21–30. https://doi.org/10.5902/2179460X26714

Edição

CIÊNCIA E NATURA, V. 19, N. 19, 1997

Seção

Artigos

Licença

Para acessar a DECLARAÇÃO DE ORIGINALIDADE E EXCLUSIVIDADE E CESSÃO DE DIREITOS AUTORAIS clique aqui.

 

Diretrizes Éticas para Publicação de Revistas

A revista Ciência e Natura está empenhada em garantir a ética na publicação e na qualidade dos artigos.

A conformidade com padrões de comportamento ético é, portanto, esperada de todas as partes envolvidas: Autores, Editores e Revisores.

Em particular, 

Autores: Os Autores devem apresentar uma discussão objetiva sobre a importância do trabalho de pesquisa, bem como detalhes e referências suficientes para permitir que outros reproduzam as experiências. Declarações fraudulentas ou intencionalmente incorretas constituem comportamento antiético e são inaceitáveis. Artigos de Revisão também devem ser objetivos, abrangentes e relatos precisos do estado da arte. Os Autores devem assegurar que seu trabalho é uma obra totalmente original, e se o trabalho e / ou palavras de outros têm sido utilizadas, isso tem sido devidamente reconhecido. O plágio em todas as suas formas constitui um comportamento publicitário não ético e é inaceitável. Submeter o mesmo manuscrito a mais de um jornal simultaneamente constitui um comportamento publicitário não ético e é inaceitável. Os Autores não devem submeter artigos que descrevam essencialmente a mesma pesquisa a mais de uma revista. O Autor correspondente deve garantir que haja um consenso total de todos os Co-autores na aprovação da versão final do artigo e sua submissão para publicação.

Editores: Os Editores devem avaliar manuscritos exclusivamente com base no seu mérito acadêmico. Um Editor não deve usar informações não publicadas na própria pesquisa do Editor sem o consentimento expresso por escrito do Autor. Os Editores devem tomar medidas de resposta razoável quando tiverem sido apresentadas queixas éticas relativas a um manuscrito submetido ou publicado.

Revisores: Todos os manuscritos recebidos para revisão devem ser tratados como documentos confidenciais. As informações ou ideias privilegiadas obtidas através da análise por pares devem ser mantidas confidenciais e não utilizadas para vantagens pessoais. As revisões devem ser conduzidas objetivamente e as observações devem ser formuladas claramente com argumentos de apoio, de modo que os Autores possam usá-los para melhorar o artigo. Qualquer Revisor selecionado que se sinta desqualificado para rever a pesquisa relatada em um manuscrito ou sabe que sua rápida revisão será impossível deve notificar o Editor e desculpar-se do processo de revisão. Os Revisores não devem considerar manuscritos nos quais tenham conflitos de interesse resultantes de relacionamentos ou conexões competitivas, colaborativas ou outras conexões com qualquer dos autores, empresas ou instituições conectadas aos documentos.