Extração de dna genômico bacteriano: uma comparação de métodos comerciais e in house

Resumo

Objetivo: Comparar e avaliar quatro diferentes métodos de extração de DNA bacteriano. Métodos: Foram utilizadas cepas de bactérias Gram positivas e Gram negativas para extração do DNA pelos seguintes métodos: fervura, lise alcalina, kit in house e kit comercial; de modo a comparar os resultados referentes as análises quantitativas e qualitativas, eficiência na PCR em tempo real, tempo, reprodutibilidade e custo. Resultados: Na análise quantitativa e qualitativa, pode-se observar que houve variações em relação aos resultados obtidos para cada amostra e para cada extração, no entanto, os métodos de fervura, lise alcalina e do kit in house apresentaram, em geral, purezas semelhantes. Já nos resultados obtidos pela PCR em tempo real todos os métodos se mostraram eficientes. Ainda, em relação ao tempo, reprodutibilidade e custo o método por fervura se destacou nos três comparativos. Conclusão: Pode-se perceber que o método de lise alcalina ganhou destaque em todos os comparativos avaliados, apresentando amplificações excelentes na PCR, boas quantidades de DNA, pureza satisfatória, tempo ideal e custo e reprodutibilidade consideráveis, tanto para bactérias Gram positivas como Gram negativas, sendo uma opção interessante para aplicação na rotina laboratorial.